摘要：通过离体实验，测定不同药物对大鼠离体脂肪组织释放游离脂肪酸（FFA）的影响，筛选出具有局部减肥作用的中药复方提取液。基于筛选出的复方中药提取物，配制成减肥按摩霜，临床实验证明有效。
关键词：离体实验；中药复合减肥剂；游离脂肪酸；局部减肥
原理：
脂肪组织在体内的分解和合成代谢存在着动态平衡。脂肪动员是指：脂肪组织经脂肪酶的作用水解，释放出甘油三酯，再分解成甘油和游离脂肪酸，脂肪酸与血清蛋白结合后被运往各组织中，经过三羧酸循环转化为能量和代谢产物排出体外的过程。因此，脂肪组织分解为甘油三酯和脂肪酸是脂肪动员的第一步，也是减肥产生作用的关键步骤。通过这一机理，检测药物分解脂肪的作用可以比较准确地反映不同药物的减肥效果。
许多药物都能够激活脂肪酶，促进脂肪动员增加，起到减肥的作用。本研究旨在利用该药理学原理进行检测，筛选出具有较好减肥作用的中草药，并比较其同复合减肥剂的作用。
１．试验材料
动物：WISTAR大鼠，由上海医药工业研究院药理研究室提供。
仪器：旋转蒸发仪，721分光光度仪（上海分析仪器厂），台式恒温振荡器，旋涡混合器，电子天平。
试剂：硬脂酸（AR），正己烷（AR），硫酸（AR），异丙醇（AR），三乙醇胺（AR），三氯甲烷（AR），冰醋酸（AR），硝酸铜（AR），正丁醇（AR），二乙基代氨基甲酸钠（AR）。小牛血清白蛋白（卫生部上海生物制品研究所）。盐酸肾上腺素（Adr，上海禾丰制药有限公司）。Tyrode培养液，含5%二氧化碳的氧气。
抽提溶媒：2mol／L硫酸20ml＋正己烷200ml异丙醇780ml。
硝酸铜试剂：1mol/L三乙醇胺+1mol/L冰醋酸50ml+5%硝酸铜500ml。将100mg二乙基代氨基甲酸钠溶解于100ml正丁醇,配制成0.1%溶液（新鲜配制使用）。
脂肪酸标准溶液：硬脂酸56.8mg, 溶解于100ml正己烷内。
脂肪酸标准应用液：上述标准液10ml，用 正己烷稀释至100ml，（实际含游离脂肪酸 0.2μmol/ml）。
试验药物：
（１） 复合减肥剂 K（上海莱博生物科技有限公司）；
（２） 咖啡因（卫生部上海生物药品研究所）；
（３） 甲状腺素（卫生部上海生物药品研究所）；
（４） 麻黄素（卫生部上海生物药品研究所）；
（５） 市售苗条霜提取成分；
（６） 番泻叶提取液；
（７） 辣椒碱（中国药品生物制品检定所）；
（８） 复合减肥剂 C（上海莱博生物科技有限公司）。
２．试验方法：
２．１ 取不饥饿的雄性大白鼠，用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉后，取出附睾脂肪垫，室温下放入生理盐水中备用。
称取脂肪组织每份200mg，共3份，分别用剪刀剪成每块10mg的脂肪组织块，放入50ml三角烧杯中，按下列条件分组：
（１）空白组：加入培养液4ml;
（２）阳性对照组：加入盐酸肾上腺素(Adr)0.1ml (20 ng/ml), 再加入培养液3.9ml。
（３）测试药物组：加入不同的待测药物0.1ml，再加入培养液3.9ml。
上述样品均被充以含5%二氧化碳的氧气10min, 37℃，振摇培养90min。然后从各培养瓶中分别吸取一定量的培养液，测定游离脂肪酸的含量，结果以μMFFA/200mg/90min表示。
２．２ 培养液中游离脂肪酸（FFA）的测定
２．２．１
标准曲线制备：取脂肪酸标准应用液0.5, 1.0 2.0, 3.0, 4.0, 和5.0 ml（分别相当于游离脂肪酸含量为0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0μmol/ml），分别放入25ml具塞试管中，加正己烷至5ml总量，再加3ml蒸馏水和抽提溶媒5ml，摇均后，静止5min。然后取上层液4ml，放入到50ml的圆底烧瓶中，用旋转蒸发仪减压回收溶剂，用5ml氯仿溶解残渣，加硝酸铜试剂2.5ml，摇均后离心5min (2000 r/min)。仔细吸掉上面的水层，取下面的氯仿液2ml，加入到另一试管中。加0.1%二乙基代氨基甲酸钠0.1 ml, 混匀后，用721分光光度仪在435nm波长下测定吸收值 (试剂空白对照：2ml氯仿+0.1%二乙基代氨基甲酸钠0.1ml，混均)。以FFA含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线图。
２．２．２
药物对大鼠脂肪组织体外释放FFA的影响
将0.25ml培养液放入25ml具塞试管中，加蒸馏水0.75ml和抽提液5ml，充分摇均后，静止5min，再加2ml蒸馏水和正己烷5ml，充分摇均后，静止，使两层分开，然后取上层液4ml，放入到50ml的圆底烧瓶中，用旋转蒸发仪减压回收溶剂，然后按照标准曲线制备项下“用5ml氯仿溶解残渣”起，依法测定吸收值，从标准曲线上读出游离脂肪酸的含量。
２．２．３
FFA释放增加％的计算
阳性对照和各测定样品的FFA含量释放增加％的计算公式：
样品测定的FFA含量—空白对照的FFA含量
FFA含量释放增加％＝ ×100%
空白对照的FFA含量
３．试验结果
1．不同药品对大鼠离体脂肪组织释放FFA的影响（ ）
样品 N 药物 (ml) ΜMFFA / 200mg / 90min 释放增加%
空白对照 5 培养液4.0 0.31±0.11 _
阳性对照 5 培养液3.9+ Adr0.1(20ng/ml) 0.90±0.28** 190.0
咖啡因 3 培养液3.9+咖啡因0.1(20ng/ml) 0.42±0.12 35.5
甲状腺素 3 培养液3.9+甲状腺素0.1(20ng/ml) 0.40±0.10 29.0
麻黄素 3 培养液3.9+麻黄素0.1(20ng/ml) 0.45±0.15 45.2
复合减肥剂 K 3 培养液3.9+复合减肥剂K 0.1 0.75±0.04** 142.0
苗条霜提取成分 3 培养液3.9+提取液0.1 0.54±0.16* 74.2
番泻叶提取液 3 培养液3.9+提取液0.1 0.32±0.16 3.2
辣椒碱 3 培养液3.9+辣椒碱0.1(20ng/ml) 0.45±0.15 45.2
复合减肥剂 C 3 培养液3.9+复合减肥剂C 0.1 1.16±0.35** 274
*与空白相比P<0.05；**与空白相比 P<0.001。
２．中草药复方提取液减肥作用的量效关系
４：临床实验：
基于以上结果，使用２％的复合减肥剂K配制按摩霜，在西安柔婷美容院使用。按照通常美容师的操作：把该产品涂于腹部与腿部，按摩30分钟，用保鲜膜包裹，晚上洗掉；每周两次，五周后测量。 结果如下：
减肥霜的临床结果
年龄 开始腰围尺 结束腰围尺 减少（五周后）% 开始腹围尺 结束腹围尺 减少（五周后）%
1# 35 2.4 2.2 9.1 2.95 2.7 9.3
2# 28 2.3 2.1 9.5 2.8 2.7 3.7
3# 40 2.2 2.0 10 2.7 2.5 8.0
4# 43 2.5 2.3 8.7 3.0 2.8 7.1
5# 38 2.6 2.4 8.3 3.0 2.7 11.1
美容师评价： 该产品减体重不明显，但腰围与腹围明显减少 ，不反弹，并有紧肤的效果，特别适合去掉赘肉
结论： 该减肥按摩霜有较好的局部减肥效果。
５．讨论
用测定大鼠离体脂肪组织释放FFA的方法来筛选减肥药物具有操作简便，迅速，外界干扰因素少，数据准确度高等优点，比较适合大量样品的筛选，同时也能排除日常生活中其他因素（如进食量，运动量等）对试验结果的影响。
从试验结果可以看出：
1、咖啡因，甲状腺素，和麻黄素对大鼠离体脂肪组织释放FFA没有明显的直接作用，说明这些药物的减肥作用主要是通过口服后，人体的精神出现兴奋，代谢增加，使能量消耗增加所致。但如果直接涂抹在局部，就没有减肥作用。而且这些药物口服时对全身的副作用非常明显，已经被列为限制使用的药物。
2、复合减肥剂 K , C和苗条霜提取液在体外能够直接促进脂肪的分解，具有分解局部脂肪组织，在涂抹处直接减肥的作用。并且复合减肥剂 K与复合减肥剂 K 的效果为苗条霜提取液的一倍左右 ;减肥剂C的效果甚至高于激素Adr. 有很强的局部减肥作用，并具有较好的量效关系。有效用量在2.5% (0.1+3.9)－5% (0.2+3.8), 不仅效果可靠，安全性高，不容易产生副作用，而且可以根据需要在自己选定的部位局部减少脂肪组织，如果配合具有促进局部血液循环的活血中药，使分解的游离脂肪酸快速离开局部，经水解后排出体外，则实际使用时效果会更加明显。
3、番泻叶提取液对大鼠离体脂肪组织释放FFA没有明显的直接作用，没有直接的局部减肥作用。番泻叶本身口服能够通过促进肠道蠕动和分泌，引起容积性腹泻，减少能量吸收，增加水分排除，达到减肥的作用，但同样副作用非常明显。
4、辣椒碱对大鼠离体脂肪组织释放FFA没有明显的直接作用，说明辣椒碱在外用时主要产生热的感觉，其减肥作用主要是通过口服后，代谢增加，使能量消耗增加所致。但如果直接涂抹在局部，就难于产生明显的减肥作用。
5、基于中药复合减肥剂的按摩减肥霜有较好的临床效果。可由于局部减肥。与减肥器械与中医按摩相结合，效果更好，是良好的局部减肥产品。
[责任编辑:李成亮]
